在液相色譜分析中，我們經(jīng)常會遇到兩個(gè)化合物無法得到基線分離或分離度差。液相色譜中流動(dòng)相條件，色譜柱選擇以及系統(tǒng)硬件的設(shè)置都會影響分離度。我們可以從以下幾個(gè)方面考慮：
1.流動(dòng)相
a. 流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的類型和比例，會影響色譜分離的選擇性。對于反相色譜模式，常用的有機(jī)溶劑有甲醇、乙腈和四氫呋喃。我們可以通過改變流動(dòng)相中的有機(jī)相種類或調(diào)整其比例，來改變選擇性和分離度。
b.流動(dòng)相的pH值和緩沖鹽的添加也會影響分離度。對于中性的化合物，無論是極性還是非極性的，流動(dòng)相pH值的改變不會對其選擇性有太大的影響；對于可解離的化合物，pH的改變會產(chǎn)生較大的影響。對于酸性化合物，比如苯甲酸，其pKa為4.2，當(dāng)流動(dòng)相pH值大于5.7（pKa+1.5），則苯甲酸以離子型態(tài)存在，則與反相固定相之間的作用較弱，保留時(shí)間較短，當(dāng)流動(dòng)相pH值小于2.7 （pKa−1.5），則苯甲酸以分子形態(tài)存在，則與反相固定相之間有更強(qiáng)的保留作用，保留時(shí)間更長。同樣，對于堿性化合物，當(dāng)流動(dòng)相的pH≥（pKa+1.5），則化合物以分子形態(tài)存在，對于反相色譜柱保留較強(qiáng)，當(dāng)流動(dòng)相的pH≤（pKa−1.5），則化合物以離子形態(tài)存在，對于反相色譜柱保留較弱。我們也可以通過添加緩沖鹽來調(diào)整流動(dòng)相的離子強(qiáng)度，來改善目標(biāo)化合物與固定相之間的保留。
2.固定相
固定相中鍵合相的類型，填料的孔徑，封端類型以及色譜柱的粒徑和尺寸都會影響色譜分離的結(jié)果。其中最主要的因素是鍵合相的選擇。如果色譜分離結(jié)果差，除了優(yōu)化流動(dòng)相之外，我們可以考慮改變鍵合相。比如，當(dāng)你采用C18固定相無法得到好的分離結(jié)果，可以考慮極性較強(qiáng)的C8固定相，或者選擇性與其有較大差異的Bonus RP或苯基己基柱進(jìn)行嘗試。或者采用封端的色譜柱代替未封端的色譜柱，對于堿性化合物的分離會得到更優(yōu)異的峰型，從而改善色譜分離的結(jié)果。另外減小色譜柱粒徑或適當(dāng)增加色譜柱的長度，也可以提高柱效，改善分離結(jié)果，比如可以采用小粒徑1.8um填料ZORBAX RRHT或RRHD色譜柱，或者表面多空層薄殼型填料poroshell120色譜柱，通過提高柱效來改善分離度。
3.硬件系統(tǒng)
對硬件系統(tǒng)的一些參數(shù)進(jìn)行調(diào)整，也可以在一定程度上改善色譜分離的結(jié)果。比如：采用較高的采樣速率來減小色譜峰的峰寬而提高分離度；采用較小內(nèi)徑的管線和較小的流通池來減小擴(kuò)散體積和延遲體積減小色譜峰的展寬；或者通過提高色譜柱的柱溫來改善分離度。
譜析公司集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和服務(wù)為一體，致力為客戶提供色譜分離分析技術(shù)、產(chǎn)品和整體解決方案。色譜技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、食品安全檢測、環(huán)境監(jiān)測、精細(xì)化工等關(guān)系民生并處于快速發(fā)展的行業(yè)。
