新冠狀病毒2019-nCoV為單鏈正鏈RNA病毒，如何檢測(cè)，山東譜析儀器和大家一起來看看?。?/span>
一、新冠狀病毒（2019-nCoV）簡介
在武漢發(fā)現(xiàn)的新冠狀病毒2019-nCoV為單鏈正鏈RNA病毒。在分類學(xué)上，2019-nCoV屬于網(wǎng)巢病毒目（Nidovirales）、冠狀病毒科（Coronaviridae）、正冠狀病毒亞科（Orthocoronaviridae）的Beta冠狀病毒屬（Betacoronavirus），同屬中還包括SARSr CoV、MERSr CoV等其它可感染人類的冠狀病毒。
通過報(bào)道的全基因組比對(duì)發(fā)現(xiàn)，2019-nCoV與SARSr CoV、MERSr CoV平均分別有~70%和~40%的序列相似性。且其與宿主細(xì)胞相互作用的spike基因（編碼S-蛋白）有更大的差異性。
SARS病毒的 S-蛋白和MERS病毒S-蛋白分別通過與人ACE2蛋白或DPP4蛋白互作結(jié)合來感染呼吸道上皮細(xì)胞。在S-蛋白的宿主受體互作區(qū)（RBD區(qū)），2019-nCoV與SARSr CoV比較相近，但是與MERSr CoV差異較大，首先排除了2019-nCoV病毒S-蛋白與DPP4互作感染人的可能。
通過分子結(jié)構(gòu)模擬計(jì)算發(fā)現(xiàn)，雖然2019-nCoV病毒S-蛋白中與人ACE2蛋白結(jié)合的5個(gè)關(guān)鍵氨基酸有4個(gè)發(fā)生了變化，但變化后的氨基酸，卻整體性上非常完美的維持了SARS病毒S-蛋白與ACE2蛋白互作的原結(jié)構(gòu)構(gòu)象。
新冠狀病毒新在哪里？如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)？
盡管武漢新型冠狀病毒的新結(jié)構(gòu)與ACE2蛋白互作能力，由于丟失的少數(shù)氫鍵有所下降（相比SARS病毒S-蛋白與ACE2的作用有下降），但仍然達(dá)到很強(qiáng)的結(jié)合自由能（-50.6 kcal/mol）。這一結(jié)果說明武漢冠狀病毒是通過S-蛋白與人ACE2互作的分子機(jī)制，來感染人的呼吸道上皮細(xì)胞。
二、新冠狀病毒（2019-nCoV）的檢測(cè)
目前的檢測(cè)都是基于提供的病毒基因組的測(cè)序，不同的公司和機(jī)構(gòu)設(shè)計(jì)開發(fā)不同的檢測(cè)試劑或測(cè)試盒，但基本原理和方法都大體一樣。衛(wèi)計(jì)委對(duì)這次新型新冠狀病毒歸為乙類傳染病，但目前按甲類傳染病控制。作為醫(yī)學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要關(guān)注的是檢測(cè)樣品傳送、檢測(cè)和樣本保存等的生物安全的控制，同時(shí)檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)和報(bào)告。
（一）送檢樣本的要求：
按照衛(wèi)計(jì)委有關(guān)醫(yī)學(xué)生物安全要求進(jìn)行。根據(jù)生物安全相關(guān)規(guī)定，新冠狀病毒2019-nCoV的送檢樣本需要滿足以下要求：
1.樣本：必須在符合生物安全規(guī)范的場所進(jìn)行取樣和包裝；
2.容器：密封、無菌，耐高/低溫度范圍-40℃～55℃（如需液氮保存時(shí)需耐受 -196℃），耐壓范圍≥ 95 KPa，防水、防破損、防泄漏，生物危險(xiǎn)性標(biāo)識(shí)、提示說明、放置方向等信息完整清晰；
3.標(biāo)簽（貼在主容器外）：類別、編號(hào)、名稱、容量；
4.相關(guān)資料（置于防水袋內(nèi)，貼于輔助容器外）：數(shù)量、危險(xiǎn)性申明、鑒定書、發(fā)送接收者信息。
（二） 檢測(cè)指導(dǎo)原則：
1.應(yīng)該在生物安全二級(jí)（BSL-2）以上級(jí)別設(shè)施中進(jìn)行相關(guān)操作；
2.同時(shí)收集上呼吸道（URT）和下呼吸道（LRT）的標(biāo)本，通過 RT-PCR 進(jìn)行 2019-nCoV 核酸檢測(cè)；
3.僅在無法使用 RT-PCR 時(shí)才建議使用血清學(xué)進(jìn)行診斷；
4.對(duì)于疑似患者，特別是患有肺炎或嚴(yán)重疾病的患者，單個(gè) URT 樣本陰性不能排除2019-nCoV感染的可能，應(yīng)增加LRT樣本，LRT（相對(duì)于 URT）樣本更可能呈陽性；
5.對(duì)于已經(jīng)確診 2019-nCoV 感染的患者，應(yīng)重復(fù)收集樣本（至少每 2-4 天收集一次），以證實(shí)病毒清除。直到患者出現(xiàn)兩個(gè)連續(xù)的至少間隔 24 小時(shí)的全陰性結(jié)果（URT 和 LRT 樣本均為陰性），可診斷臨床康復(fù)。
（三）樣本檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟：
對(duì)于新病毒的RT-PCR測(cè)試，不同來源的試劑盒要求的實(shí)驗(yàn)操作不盡相同，應(yīng)根據(jù)試劑盒說明書要求進(jìn)行操作。
以下是典型的RT-PCR操作步驟：
1.取樣（URT 和 LRT 樣本）；
2.取適量樣本與核酸提取液充分混勻；
3.對(duì)混合液進(jìn)行金屬浴，95℃溫育5 min，4℃冷卻3 min；
4.對(duì)處理后的混合液進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)。
三、檢測(cè)相關(guān)的儀器及材料
（一）相關(guān)的儀器設(shè)施
1.實(shí)時(shí)熒光PCR儀
2.全自動(dòng)核酸分離系統(tǒng)
3.高壓滅菌鍋
4.生物安全柜（符合要求的）
5.冷凍離心機(jī)（10000轉(zhuǎn)/分以上，氣溶膠防護(hù)操作）
6.移液槍 （氣溶膠防護(hù)操作）
7.符合生物安全要求的隔離條件實(shí)驗(yàn)室或區(qū)域。
（二）檢測(cè)試劑
1.病毒核酸檢測(cè)熒光試劑（或試劑盒）
2.核酸提取試劑（或商業(yè)化的提取試劑盒）
3.ＲT-PCR試劑
（三）相關(guān)器材
1.TIP頭，離心管，手套，聯(lián)排PCR管等。
2.人的安全防護(hù)：防護(hù)服、手套、N95口罩、 防護(hù)眼罩。生物安全消毒袋、有效的消毒液。
以上由山東譜析儀器根據(jù)網(wǎng)絡(luò)整理簡要介紹，供參考。
