甘蔗是我國最重要的糖料作物，它不僅是食糖業(yè)的重要原料，而且是能源、化工、釀酒和飼料的原料。甘蔗節(jié)間含有大量的糖分，主要有葡萄糖、果糖和蔗糖這三種糖類碳水化合物。無論是感官還是研究表明，甘蔗在不同生長時期、不同節(jié)間糖分含量存在較大差異。因此分析測定甘蔗不同時期、不同節(jié)間糖含量，分析多種糖分生長積累的規(guī)律，進(jìn)而運用統(tǒng)計分析的方法了解蔗糖分積累與糖代謝相關(guān)酶活性變化之間的關(guān)系，從生長機理各個方面探討研究甘蔗生長過程和糖分積累的規(guī)律，并為甘蔗高產(chǎn)高糖栽培及遺傳改良等提供理論上的依據(jù)。
糖含量的測定方法有化學(xué)比色法、旋光法、氣相色譜法和液相色譜法。一般化學(xué)法只能測定各種糖的總量而不能分別測定各種糖的含量，并且有研究表明，測得的葡萄糖、果糖值比實際值略高而存在偏差，極有可能影響甘蔗品質(zhì)的判斷。氣相色譜法雖可分別測定不同糖的含量，靈敏度高，但是由于糖類化合物沸點高，難以汽化，必須進(jìn)行衍生化反應(yīng)才可檢測，樣品處理、分析檢測步驟較為繁瑣，且認(rèn)為干擾誤差較大。
譜析色譜實驗室，采用本公司生產(chǎn)的LC-3000高效液相色譜儀分析檢測蜂蜜、菠蘿、馬鈴薯等中不同糖類碳水化合物含量，已在實際應(yīng)用中取得良好的分析效果，得到客戶的肯定。目前，甘蔗節(jié)間糖類碳水化合物含量測定目前報道主要采用一般的化學(xué)方法。譜析儀器公司充分吸收國內(nèi)外相關(guān)研究方案，對分析條件進(jìn)一步優(yōu)化，采用碳水化合物分析專用色譜柱對甘蔗節(jié)間糖分進(jìn)行分離分析，建立一種簡便、快速和準(zhǔn)確可靠的，能同時測定果糖、葡萄糖、蔗糖含量的高效液相色譜儀分離法。
1.儀器與試劑
高效液相色譜儀LC-3000（山東譜析），示差折光檢測器，針孔進(jìn)樣器。葡萄糖、果糖、蔗糖標(biāo)樣為國產(chǎn)色譜純(純度均不低于99.5%)，乙腈為色譜純，實驗用水為超純水。
2.色譜分析條件
色譜柱：Agilent Zorbax carbohydrate柱(4.6mm×250mm，5.0μm)；流動相為乙腈-水(75:25，V/V)；柱溫30℃；檢測池溫度35℃；流速1.0mL/min，進(jìn)樣量20μL。
3.糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
準(zhǔn)確稱取果糖、葡萄糖、蔗糖各2.0g(精確到0.0001g)，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用高純水定容至刻度，得到各自質(zhì)量濃度均為20mg/mL的混標(biāo)溶液。逐級稀釋至10、5、2.5、1.25、0.625mg/mL。上機進(jìn)樣分析前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。每個樣品重復(fù)3次。
4.樣品處理
將冷凍的節(jié)間樣品去皮，切碎，在液氮中磨成粉末狀，精確稱取樣品粉末1.00g(精確到0.0001g)，加入80%的乙醇5mL，80℃恒溫水浴30min后，12000r/min離心20min，取上清液，殘渣加入5mL 80%的乙醇溶液重復(fù)提取1次，合并提取上清液，90℃水浴中蒸干乙醇，加入高純水定容至5mL，混勻后用一次性注射器抽取提取樣液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后以備上機進(jìn)樣分析。每個樣品重復(fù)3次。
譜析分析結(jié)果表明，采用高效液相色譜儀分析甘蔗節(jié)間果糖、葡萄糖、蔗糖，保留時間重現(xiàn)性好，三者的含量和峰面積比值之間呈良好的線性關(guān)系，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差較好，加標(biāo)回收率準(zhǔn)確度較高，是一種檢測分析甘蔗節(jié)間糖分組成和含量的簡便、快速、準(zhǔn)確的方法。如有相關(guān)分析需求請與山東譜析科學(xué)儀器有限公司0632-5571618聯(lián)系，亦可登錄公司網(wǎng)站在線即時了解咨詢。
